Monkeypox virusi real vaqtda PCR to'plami
Mahsulot tafsilotlari
Foydalanish maqsadi
U real vaqtda PCR tizimlaridan foydalangan holda inson zardobida yoki lezyon ekssudati namunalarida maymunpox virusini aniqlash uchun ishlatiladi.
Sinov printsipi
Ushbu mahsulot lyuminestsent probga asoslangan Taqman® real vaqtda PCR tahlil tizimidir.Maxsus primerlar va problar maymun pox virusining F3L genini aniqlash uchun mo'ljallangan.Insonning saqlanib qolgan geniga qaratilgan ichki nazorat noto'g'ri-salbiy natijalarga yo'l qo'ymaslik uchun namuna to'plash, namunalarni qayta ishlash va real vaqtda PCR jarayonini kuzatib boradi.To'plam maymun pox virusini aniqlash uchun zarur bo'lgan materiallarni o'z ichiga olgan to'liq premiksli liyofillangan tizimdir: nuklein kislotani kuchaytirish fermenti, UDG fermenti, reaksiya buferi, maxsus primer va prob.
Asosiy tarkib
Taqdim etilgan komponentlar jadvalda keltirilgan.
| Komponentlar | Paket | Tarkibi |
| Maymun pox virusiLiyofillangan premiks | 8 ta chiziqli PCR naychalari× 6 ta sumka | Primerlar, zondlar, dNTP/dUTP aralashmasi, Mg2+, Taq DNK polimeraza, UDG fermenti |
| MPV musbat nazorati | 400 mkl × 1 naycha | Target genini o'z ichiga olgan DNK ketma-ketligi |
| MPV salbiy nazorati | 400 mkl × 1 naycha | Inson gen segmentini o'z ichiga olgan DNK ketma-ketligi |
| Erituvchi eritma | 1 ml × 1 naycha | Stabilizator |
| Muvofiqlik sertifikati | 1 dona | / |
Operatsiya oqimi
1. NamunaToʻplam:Namuna mos ravishda steril naychalarga to'planishi kerak
standart texnik xususiyatlar bilan.
2. Reaktivni tayyorlash (Reagent tayyorlash maydoni)
To'plamning tarkibiy qismlarini chiqarib oling, ularni kutish rejimida ishlatish uchun xona haroratida muvozanatlang.
3. Namunani qayta ishlash (namunani qayta ishlash maydoni)
3.1 Nuklein kislota ekstraktsiyasi
Virusli DNK ekstraktsiya to'plamlarining tegishli talablari va protseduralariga muvofiq, nuklein kislota ekstraktsiyasi uchun 200 mkl suyuqlik namunalarini, Ijobiy nazorat va salbiy nazoratni olish tavsiya etiladi.
3.2 Liyofillangan kukunni erituvchi va shablonni qo'shish
Namunalar soniga ko'ra maymunchechak virusi liyofillangan premiksini tayyorlang.Bitta namunaga liyofillangan premiks kukuni bo'lgan bitta PCR trubkasi kerak bo'ladi.Salbiy nazorat va ijobiy nazorat ikkita namuna sifatida ko'rib chiqilishi kerak.
(1) Liyofillangan premiksni o'z ichiga olgan har bir PCR trubasiga 15 mkL erituvchi eritma qo'shing, so'ngra har bir PCR trubasiga mos ravishda 5 mkL ekstrakte qilingan namunalar/salbiy nazorat/musbat nazorat qo'shing.
(2) PCR naychalarini mahkam yoping, liyofillangan kukun to'liq eriguncha va aralashtirilgunga qadar PCR naychalarini qo'l bilan silkiting, past tezlikda santrifüjlash orqali suyuqlikni PCR naychalarining tubiga to'plang.
(3) Aniqlash uchun umumiy real vaqtda PCR asbobidan foydalansangiz, PCR naychalarini to'g'ridan-to'g'ri kuchaytirish maydoniga o'tkazing;Agar aniqlash uchun BTK-8 dan foydalanilsa, unda quyidagi operatsiyalarni bajarish kerak: PCR trubkasidan BTK-8 ning reaksiya chipiga 10 mkl suyuqlik o'tkazing.Bitta PCR trubkasi chipdagi bitta quduqqa mos keladi.Pipetlash jarayonida pipetka 90 daraja vertikal holatda ekanligiga ishonch hosil qiling.Aerozolli to'siqli pipetka uchlari quduqning o'rtasiga o'rtacha kuch bilan joylashtirilishi kerak va pipetka birinchi vitesga yetganda (pufakchalar paydo bo'lmasligi uchun) uni itarib yuborishni to'xtating.Quduqlar to'ldirilgandan so'ng, barcha quduqlarni yopish uchun reaksiya chip membranasini oling va chip keyin kuchaytirishni aniqlash maydoniga o'tkaziladi.
4. PCR kuchaytirilishi (aniqlash maydoni)
4.1 PCR trubkalarini/reaktsiya chipini reaksiya idishiga soling va har bir reaksiya qudug'ining nomlarini mos keladigan tartibda o'rnating.
4.2 Flüoresansni aniqlash sozlamalari: (1) Maymun pox virusi (FAM);(2) Ichki nazorat (CY5).
4.3 Quyidagi velosport protokolini ishga tushiring
ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio protokoli:
| Qadamlar | Harorat | Vaqt | Velosipedlar | |
| 1 | Oldindan denaturatsiya | 95℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denaturatsiya | 95℃ | 10 s | 45 |
| Yuvish, kengaytirish, floresan olish | 60℃ | 30 s | ||
BTK-8 protokoli:
| Qadamlar | Harorat | Vaqt | Velosipedlar | |
| 1 | Oldindan denaturatsiya | 95℃ | 2 min | 1 |
| 2 | Denaturatsiya | 95℃ | 5 s | 45 |
| Yuvish, kengaytirish, floresan olish | 60℃ | 14 s | ||
5. Natijalarni tahlil qilish (iltimos, asbobdan foydalanuvchi qo'llanmasiga qarang)
Reaksiyadan so'ng natijalar avtomatik ravishda saqlanadi.Tahlil qilish uchun "Tahlil qilish" tugmasini bosing va asbob natija ustunidagi har bir namunaning Ct qiymatlarini avtomatik ravishda izohlaydi.Salbiy va ijobiy nazorat natijalari quyidagi "6. Sifat nazorati" ga mos kelishi kerak.
6. Sifat nazorati
6.1 Salbiy nazorat: FAM kanalida Ct yoki Ct>40 yo'q, normal kuchaytirish egri chizig'i bilan CY5 kanalida Ct≤40.
6.2 Ijobiy nazorat: normal kuchaytirish egri chizig'iga ega FAM kanalida Ct≤35, normal kuchaytirish egri chizig'i bilan CY5 kanalida Ct≤40.
6.3 Natija yuqoridagi barcha mezonlar bajarilgan taqdirda haqiqiy hisoblanadi.Aks holda, natija haqiqiy emas.
Natija talqini
Quyidagi natijalar mumkin:
| FAM kanalining Ct qiymati | CY5 kanalining Ct qiymati | Izoh | |
| 1# | Ct yoki Ct>40 yo'q | ≤40 | Maymun pox virusi salbiy |
| 2# | ≤40 | Har qanday natijalar | Monkeypox virusi ijobiy |
| 3# | 40～45 | ≤40 | Qayta sinov;agar u hali ham 40 ~ 45 bo'lsa, 1 # deb xabar bering |
| 4# | Ct yoki Ct>40 yo'q | Ct yoki Ct>40 yo'q | Yaroqsiz |
ESLATMA: Agar noto'g'ri natija yuzaga kelsa, namunani yig'ish va qayta tekshirish kerak.
Buyurtma haqida ma'lumot
| Mahsulot nomi | Mushuk.Yo'q | Hajmi | Namuna | Saqlash muddati | Trans.& Sto.Temp. |
| Monkeypox virusi real vaqtda PCR to'plami | B001P-01 | 48 ta test / to'plam | Sarum/lezyon ekssudati | 12 oy | -25～-15℃ |
